影響高效液相色譜儀分離度的因素有色譜柱填充性能、流動相和流速等。

一、色譜柱填充性能：

高效液相色譜柱的分離性能由固定相粒度、柱長和柱壓降（由柱內徑和柱填充狀況決定）決定，這三個參數度也決定了樣品組分的保留時間。保留時間不僅與色譜過程的熱力學因素k有關，還與決定柱效和分離度的柱性能參數及流動相的粘度有關，這些參數都是影響色譜分離過程動力學的重要因素。

在高效液相色譜中，色譜柱的制備是一項技術要求非常高的工作。

二、流動相：

高效液相色譜中，改變淋洗液組成和極性是改善分離的最直接因素，不可能通過增加柱溫來改善傳質。因此，高效液相色譜大多是恒溫分析。流動相選擇在高效液相色譜中顯得特別重要，流動相可顯著改變組分的分離狀況。

三、流速：

流速大于0.5cm/s時，H－u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實際操作中，流量仍是一個調整分離度和出峰時間的重要參數。

   

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